Exosome:临床样本研究实验设计和正常对照
添加时间:2019-01-14 17:09:13
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临床样本取样正确与否直接关系到下游实验检测。很多因素会影响样本质量,需要格外注意。
实验组:
三种实验分别需要不同水平的对照和流程,需要根据研究的问题设定流程。
a.科研类实验需要研究外泌体的数量,大小,exRNA cargo,蛋白质组,脂质组学,代谢组学,糖原组学和其他的体液特征。尤其在筛选外泌体的亚群的分子标记,或者通过大小结构电荷分离,需要注意实验应具有重复性。比如应减少血小板和中性白细胞来源的外泌体。
b.诊断类实验是需要研究疾病进程与biormarker特异性和数量相关性特征。为了验证特异性和检测Marker的相关性,在外泌体分离时必须要检测特定的临床病理体液样本。与目前的诊断手段相比,这类研究,能够提高检验敏感性,减少费用或降低发病率。
c.制备类实验是为病人制备外泌体的研究。这需要最高水平的标准,即需要保留外泌体的功能,还需要纯化的外泌体。
对照组:
对照组应该与病人(性别,年龄等相符),另外还有很多因素都与外泌体的分泌有关,包括年龄、性别、种族、体重系数 (body mass index,BMI) 和用药(比如口服避孕药)。另外,女性还需要考虑怀孕与否,是否多胎妊娠等。空腹和餐后状态影响血浆脂蛋白和外泌体的水平。另外,患病如感冒也应该考虑,因为急性感染会影响circulating cells 和 RNA。样本采集前是否进行体育锻炼,是否进行过肝素治疗应该考虑,因为会影响下游PCR反应,影响外泌体与受体细胞的结合。
Q:同一样本的进行多次重复检测是否可以用来做计算样本间差异(individual differences)?
A:不可以。同一样本取样后分装,可以用来验证外泌体的分离效果,RNA提取和后续检测的操作差异性;或者从同一样本多个时间点取样可以用来检测特定外泌体 marker的时间差异性。但是还有一种情况就是,同一癌症病人手术前样本和手术后的样本是可以配对的,或者感染前和感染后的同一样本可以配对比较。
备注:
年龄
性别
种族
女性:怀孕、妊娠、排卵周期、绝经期。
住院(目前)
抗凝治疗
肝素治疗
肝素类似物
阿司匹林
外周静脉凝血疾病,肺(肺栓塞)
目前用药清单
抽烟
滥用药物
每周运动情况
每天工作或家庭活动
坚持体育锻炼<每周3h
坚持体育锻炼>每周3h
睡眠情况
最后的饮食、饮水情况
其他饮食因素
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